猪细小病毒诊断与防制方法研究进展

猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)感染而引起的胚胎感染及死亡，而母猪不表现明显症状的繁殖障碍性疾病。本病广泛分布于世界各地，给养猪业造成巨大的经济损失。引起该病的猪细小病毒是Mary和Mahnet于猪瘟病毒的组织培养时发现的。从20世纪60年代中期，分离病毒和逐步明确其致病作用以来，已相继从欧洲、美洲和亚洲等很多国家分离到该病毒和检测到抗体。我国在20世纪80年代初就有该病的报道，先后从上海、北京、吉林和黑龙江等地分离到该病毒，血清学调查阳性率为80%。猪细小病毒常与其他病原混合感染而致病。邬捷等（1987）报道了我国猪细小病毒与乙型脑炎病毒混合感染。目前又相继有人报道猪细小病毒和圆环病毒、繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)混合感染的情况。正由于猪细小病毒感染面广且感染后造成严重的经济损失，许多学者进行了猪细小病毒诊断防治的研究，现综述如下。
1 猪细小病毒的诊断方法
1．1 分离鉴定
取70日龄以内流产胎儿、死产仔猪肾、睾丸、肺、肝、肠系膜淋巴结或母猪胎盘、阴道分泌物制成无菌悬液，接种细胞并培养，若病料中含有本病毒，16～36小时可观察到细胞核内包涵体，5～10天可见特征性细胞病变,再用血清学方法确诊。病毒分离和鉴定结果准确可*，可以用作最后确诊。但费时费力，并且需要一定的技术条件和设备。
1.2 血清学检测
1.2.1 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)
血凝试验：该试验即使在死亡时间较长病毒无污染性的木乃伊胎中也可检出抗原。
血凝抑制试验：母猪感染后最早5天可检测到抗体，此后维持高滴度至少达4年。Joo等（1976）建立了HI试验的标准方法，主要用于猪细小病毒感染后的抗体检测。韩孝成等(1996)、胡秀芳等(1989)、金岳等(1985)许多学者也对该方法进行了研究和探索。
HA-HI试验检测PPV抗体具有操作简便，不需要特殊设备等优点，因此国内一直使用HA-HI来检测抗原和抗体。但该方法需要采鸡或豚鼠血洗血球，必须对被检样品做繁杂的特殊处理，并只能证明有PPV感染，不能证明是否新近感染。虽能进行快速、大量的诊断，但是其灵敏度低、特异性不强，只能作为辅助诊断方法。
1.2.2 血清中和试验 可用于猪感染PPV后的抗体检测。Johnsonhe等(1971)及Joo等(1975)报道，经比较发现中和试验比HI试验敏感。该方法还可用于鉴定病毒和流行病学调查。中和试验操作较为复杂，首先要进行感染力的测定，低剂量不引起细胞病变，从而限制了该方法的使用。
1.2.3 对流免疫电泳 Gaitamonova等(1990)首先采用对流免疫电泳技术实验室诊断PPV。我国王川庆（1996）也利用对流免疫电泳技术对猪细小病毒抗原和抗体进行了检测，与其他方法相比，对流免疫电泳的突出特点是简便、快速、稳定，且抗原血清不需要做任何特殊处理。
1.2.4 乳胶凝集试验 何启盖等（1999）建立了乳胶凝集试验来检测细小病毒的抗体。抗原与细小病毒阳性血清反应出现凝集颗粒(与其它病阳性血清、生理盐水不出现凝集现象)。乳胶凝集试验具有简便、准确的优点。目前该方法已应用于临床实践。
1.2.5 免疫荧光技术 Rivera 等(1986)应用固相荧光免疫技术快速检测PPV感染胎儿的抗原和抗体，结果发现固相荧光免疫技术与ELISA有相同的敏感性，而且比HI试验敏感。董齐等（1999）为了既提高检出率，又适于检验部门的应用，将PPV高免血清与胎儿组织中PPV抗原形成特异的反应，再加免疫猪IgG 荧光抗体扩大抗原抗体反应的范围来提高检出率，建立了间接免疫荧光技术。该方法有特异、敏感、快速和检出率高等优点。
1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）
Hohdatsu等（1988）建立了细小病毒ELISA。经比较证明，ELISA检测PPV抗体与HI 试验的结果是一致的，可用于PPV抗体的检测。Westenbrink等 （1989）应用竞争性ELISA检测PPV抗体并与HI进行比较研究。Jenkins 等（1992）将ELISA应用于胎儿组织PPV抗原检测的研究，并与免疫荧光和HI试验比较。这些研究结果显示出ELISA在特异性、敏感性和检测速度等方面优于免疫荧光和HI。
我国邱建明等（1989）建立了PPA-ELISA法来测定母猪血清中抗细小病毒抗体。谢琴等（1996）研制出猪细小病毒单克隆抗体，并把已研制出的单克隆抗体采用ELISA试验方法对当地308份血清进行了检测，结果阳性检出率达66.6%。ELISA试验与传统的HI试验进行比较，其敏感性高，ELISA阳性检出率为85.7%，而HI 阳性检出率为80%。单克隆抗体具有特异性强、效价高，并可在体外大量制备等优点，再配合灵敏性强的ELISA试验方法是非常可行的，用此方法有助于PPV的早期诊断和流行病学调查。
在实践中，由于PPV疫苗的使用，很难区分免疫接种感染还是自然感染，所以仅凭检测抗体很难确诊，必须建立检测抗原的方法。
姜永厚等（1997）建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒抗原的ELISA双抗夹心法。张晓根等（1994）研究出间接DOT-ELISA用于检测PPV抗原。
1.4 银加胶体金技术
黄瑜等（1995）首次成功研制了检测细小病毒抗原的银加胶体金检测法，并确定了最佳试验条件。应用该法对纯化PPV抗原的最小检出量为0.312 5 mg/点。其敏感性为